Medios de cultivo

Objetivo: El objetivo de la práctica es conocer los distintos tipos de bacterias que crecen en los medios de cultivo, que son el agar sangre, el sal y manitol, y el mack conkey.
Pasos para poder hacer los medios de cultivo: El primer paso para poder hacer los medios de cultivo es buscar tres cajas de petri y envolverlas par poder meterlas a esterilizar.
Y aprovechando que se iba meter a esterilizar de una vez se meten los hisopos, y mientras esto se esteriliza se hacen los agares.
Pasos para preparar los agares: El primer paso para poder hacer los medios de cultivos es sacar los cálculos para saber cuanto se va a pesar de cada agar, después de que se sacan los cálculos de los agares se pesan en la balanza analítica con un vidrio de reloj, y se vacian a un matraz. Después se ponen 25 ml de agua destilada en cada matraz con su respectivo agar, y con un mechero se le quitan los grumos que pudieron haber quedado en el agar. Luego se hacen los tapones que lleva cada matraz.
Para hacer los tapones de los matraces se toma un pedazo de algodón y se envuelve con gaza y se cierra con cinta, ya que están hechos los tapones se colocan en cada matraz, ya que están en el matraz con un pedazo de papel se hace una especie como de gorrito que va encima de el tapón y de la boquilla del matraz, también se cella con cinta y ya quedan los matraces con los agares listos para poder meterlos a esterilizar. Y como ya esta listo se saca el material que aviamos metido anteriormente a la autoclave y se guarda para poder meter los agares a esterilizar. Ya que los agares están esterilizados se sacan de la autoclave y se dejan enfriar a temperatura ambiente para poder vaciar a las cajas de petri.
Pasos para vaciar: Para poder vaciar primero limpiamos la mesa de trabajo, la limpiamos con jabón y luego con una pinza y un algodón con cloroformo desinfectamos toda la mesa y también desinfectamos los mecheros para poder ponerlos en la mesa ya que estaba limpia la mesa pusimos las cajas de petri en la mesa y no las abrimos. Después prendimos los mecheros para poder vaciar los agares, los agares tienen que estar a temperatura ambiente o a tacto, para poder vaciar al agar sangre se le tiene que agregar precisamente eso sangre y tienen q ser 1.25 ml de sangre y se le tiene que agregar y vaciar inmediatamente porque si no se coagula, ya que esta vaciado el agar sangre a hora se sigue con los otros dos agares y ya que esta vaciado en los 3 medios con un mechero se le quitan las burbujas que quedaron y se dejan un tiempo a que coagulen los agares para poder sembrar.
Pasos para sembrar: Para sembrar tome un hisopo y tome una muestra de orofaringe y sembré en el agar sangre y luego en el manitol y al final en el mack conkey y cerré las cajas y las metí a la incubadora a 37 grados y espere de 24 a 72 horas.
Observación: Cuando revise los agares note que no había crecido nada mas que en el agar sangre y en los otros dos agares no creció nada, haci espere hasta las 72 horas y no creció nada y me di cuenta de mi error.
Error: Mi error estuvo en no tomar el pH de los agares y luego en que primero sembré en el agar sangre y como en el agar sangre crecen todas las bacterias se quedaron todas las del hisopo y cuando sembré en los otros agres ya no había bacterias para que crecieran.
Tinción gramm: Como en el agar sangre si crecieron bactrias hice una tinción para ver que tipos de bacterias crecieron, en la tinción pude ver que crecieron cocos, diplococos, estreptococos, y estafilococos y la mayoría eran gramm positivos.
Conclusión: En los medios de cultivo enrriquesidos como el agar sangre crecen todo tipo de bacterias y la mayoría son gramm positivos, en el agar manitol devio de a ver crecido la bacteria llamada estafilococo aurus paro como no sembré bien no creció y en el mack conkey no creció nada no solo por que no sembré bien si no por que en ese agar solo iba a crecer una bacteria que fuera de materia fecal y como no había no creció.

bacterias grampositivas y gram-negativas

bacterias gram-nagativas

En microbiología, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que no se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de ahí el nombre de "Gram-negativas" o también "gramnegativas". Esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, las otras son las bacterias Gram positivas.[1]
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptiglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.
Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Los cocos Gram-negativos causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis (Neisseria meningitidis) y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran número de especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Hemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi). Otros están asociadas a infecciones nosocomiales (Acinetobacter baumanii).
La envoltura celular de las bacterias Gram-negativas está compuesta por una membrana citoplasmática (membrana interna), una pared celular delgada de peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared celular de estas bacterias. Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana externa se localiza el espacio periplásmico relleno de una sustancia denominada periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias.
La membrana externa contiene diversas proteínas, siendo una de ellas las porinas o canales proteícos que permiten el paso de ciertas sustancias. También presenta unas estructuras llamadas lipopolisacáridos (LPS), formadas por tres regiones: el polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A (endotoxina).
Las bacterias Gram-negativas pueden presentar una capa S que se apoya directamente sobre la membrana externa, en lugar de sobre la pared de peptidoglicano como sucede en las Gram-positivas. Si presentan flagelos, estos tienen cuatro anillos de apoyo en lugar de los dos de las bacterias Gram-positivas porque tienen dos membranas. No presentan ácidos teicoicos ni ácidos lipoteicoicos, típicos de las bacterias Gram-positivas. Las lipoproteínas se unen al núcleo de polisacáridos, mientras que en las bacterias Gram-positivas estos no presentan lipoproteínas. La mayoría no forma endosporas (Coxiella burnetti, que produce estructuras similares a las endosporas, es una notable excepción).

bacterias grampositivas

En microbiología, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas" o también "grampositivas". Esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, las otras son las bacterias Gram negativas.
La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. A diferencia de las Gram-negativas, estas bacterias no presentan una segunda membrana lipídica externa.
Incluyen especies tanto móviles (vía flagelos) como inmóviles con forma de bacilo (Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Lactobacillus, Listeria) o coco (Staphylococcus, Streptococcus); con gruesas paredes celulares o sin ellas (Mycoplasma). Algunas especies son fotosintéticas, pero la mayoría son heterótrofas. Muchas de estas bacterias forman endosporas en condiciones desfavorables. Realmente, no todas las bacterias del grupo son Gram-positivas (no se tiñen por la aplicación de ese método), pero se incluyen aquí por su similitud molecular con otras bacterias Gram-positivas.

proteasas

Las proteasas son unos enzimas que actúan principalmente en el gluten de la harina. Tienen diversos orígenes, las fúngicas, procedentes del hongo Aspergillus oryzae, actúan en panificación de la siguiente forma:
Reducen el tiempo de amasado. En el amasado se produce una fricción entre la masa, el brazo amasador y el recipiente que se traduce en un aumento de la temperatura final de la masa, energía que favorece la formación de puentes disulfuro del gluten y aumenta la tenacidad de la harina; por tanto, aumenta el tiempo de amasado. En presencia de proteasas los puentes disulfuro no se forman, con lo cual la masa opone menos resistencia por ser menos tenaz y se amasa antes.
Mejoran la maquinabilidad. Las proteasas fúngicas al romper enlaces disulfuro intermoleculares de las cadenas peptídicas responsables de la dureza al gluten, devuelven la extensibilidad y la relajación a la masa, cuyo comportamiento, ahora, será más dócil y maquinable en el formado, por reducir la elasticidad natural que tiende a recuperar la masa del estiramiento a que es sometida en el formado de la barra.

Hialuronidasa.
La hialuronidasa es un enzima de los espermatozoides que se encarga de denudar la corona radiada durante el proceso de fecundación. Además se encuentra en algunas bacterias patógenas, siendo un factor de virulencia, ya que este enzima hidroliza el ácido hialurónico de la matriz extracelular. También está presente en el veneno de la mayoría de las serpientes.[1]
Esta enzima también es tomada en cuenta en la participación de la exención o diseminación de los tumores malignos al existir la teoría de que las celulas neoplasicas secretan hialoronidasa para así destruir ( a manera de como lo hace en la denudacion de la corona radiada)la matriz extracelular e infiltrarse en tejidos vecinos

PRUEBA DE LA CATALASA
Objetivo: Separar la Flia. Micrococacceae (catalasa +) de los Géneros Streptococcus y Enterococcus (catalasa -).
Fundamento: La enzima catalasa descompone el peróxido de hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno bajo la fórmula 2 H2O2----2 H2O + O2. De esta manera las bacterias se protegen del efecto tóxico del H2O2, que es un producto final del metabolismo aerobio de los azúcares.
Interpretación de resultados: El desprendimiento de burbujas se considera una prueba positiva. Dentro de la Flia.